干細(xì)胞凍存液是用于在低溫環(huán)境中保存干細(xì)胞活性與功能的重要溶液,其關(guān)鍵成分對(duì)維持干細(xì)胞的完整性和活性至關(guān)重要。以下是干細(xì)胞凍存液中常見(jiàn)的關(guān)鍵成分及其作用:
1. 二甲基亞砜(DMSO)
DMSO 是一種常用的滲透性冷凍保護(hù)劑。它能夠穿透細(xì)胞膜,通過(guò)與水分子形成氫鍵,干擾冰晶的形成,從而減少冰晶對(duì)細(xì)胞膜的損傷。此外,DMSO 還可以降低細(xì)胞內(nèi)外的滲透壓差,防止細(xì)胞在冷凍過(guò)程中因水分外滲而過(guò)度脫水皺縮。在臨床和實(shí)驗(yàn)室中,DMSO 的濃度通??刂圃?5% - 10% 之間,以平衡其保護(hù)效果和細(xì)胞毒性。
2. 胎牛血清(FBS)
胎牛血清富含蛋白質(zhì)、生長(zhǎng)因子和營(yíng)養(yǎng)成分,能夠?yàn)楦杉?xì)胞提供豐富的營(yíng)養(yǎng)支持。在凍存過(guò)程中,F(xiàn)BS 可以保護(hù)細(xì)胞膜,減少細(xì)胞因冷凍而受到的機(jī)械損傷,同時(shí)也有助于維持細(xì)胞的代謝平衡。通常,F(xiàn)BS 在凍存液中的濃度為 10% - 20%。
3. 葡萄糖
葡萄糖是細(xì)胞的主要能量來(lái)源之一。在凍存液中添加葡萄糖,可以幫助細(xì)胞在冷凍過(guò)程中維持一定的代謝活性,為細(xì)胞在復(fù)蘇后快速恢復(fù)活力提供能量支持。
4. 非滲透性保護(hù)劑
一些凍存液中還會(huì)添加非滲透性保護(hù)劑,如蔗糖、甘油等。這些成分不能穿透細(xì)胞膜,但可以在細(xì)胞外形成高滲環(huán)境,促使細(xì)胞內(nèi)的水分向外滲透,從而減少細(xì)胞內(nèi)的冰晶形成。例如,一種不含 DMSO 的凍存液配方中包含蔗糖、甘油和異亮氨酸,這種組合在某些研究中顯示出與傳統(tǒng)含 DMSO 的凍存液相當(dāng)?shù)男Ч?br />
5. 其他添加劑
一些特殊的凍存液配方中還會(huì)加入其他成分以增強(qiáng)保護(hù)效果。例如,淀粉(HES)被證明在胚胎干細(xì)胞的凍存中可以作為有效的添加劑,有助于提高細(xì)胞的存活率。此外,某些研究還嘗試添加 caspase 抑制劑(如 zVAD-fmk)來(lái)減少細(xì)胞在冷凍和解凍過(guò)程中因凋亡而受到的損傷。
這些關(guān)鍵成分通過(guò)協(xié)同作用,為干細(xì)胞在低溫環(huán)境中的保存提供了全面的保護(hù)。它們不僅能夠減少冰晶對(duì)細(xì)胞的物理?yè)p傷,還能維持細(xì)胞的代謝平衡和膜完整性,從而確保干細(xì)胞在長(zhǎng)時(shí)間低溫保存后仍能保持其活性和功能。